Fonctionnellement, l’électrophorèse est une technique qui consiste à la migration proportionnée des molécules à travers un gel ou un autre type de matrice poreuse, selon leur poids moléculaire ou leur taille ; mouvement généré par le champ électrique, c’est-à-dire que nous appliquons un courant électrique aux molécules qu’elles soient biologiques, ADN, protéines ou ARN, et qu’elles soient séparées en fonction de leur taille ou de leur taille.
Généralement, la plupart des biomolécules ont une charge électrique dont l’ampleur est fonction du pH du milieu dans lequel elles se trouvent ; immédiatement après cela, les molécules peuvent se déplacer lorsqu’elles sont soumises à un champ électrique vers le pôle de charge opposé à celui de la molécule. Selon la molécule, celle-ci se déplace vers l’intérieur, l’extérieur, le haut ou le bas du gel.
Processus moléculaire effectué par certains échantillons pour l’électrophorèse.
- Dans les protéines : vous prenez généralement la protéine entière pour voir à quel point elle est grande. Plus elle est courte, plus elle migre dans le gel, de sorte que les petites protéines finiront dans la partie inférieure du gel, parce qu’elles sont allées plus loin, et les plus grandes finiront par rester dans la partie supérieure.
- Dans l’ADN : c’est une très longue molécule, donc vous ne pouvez pas faire un gel d’une molécule entière d’ADN d’une cellule. Elle est si grande qu’on ne la mettrait jamais dans un gel, donc ce que les scientifiques font c’est qu’ils coupent l’ADN avec des choses comme les enzymes de restriction, ils coupent l’ADN en morceaux plus faciles à manipuler, et ces pièces, en fonction de leur taille, migrent plus ou moins à travers le gel et finissent plus haut ou plus bas.
- les acides nucléiques ont une charge négative uniquement en raison de leur squelette de phosphates. Par conséquent, dans une électrophorèse, les acides nucléiques migreront vers le pôle positif ; c’est-à-dire l’anode. Il constitue donc une partie importante de la procédure systématique d’analyse (séparation, purification, préparation) des acides nucléiques.
Éléments nécessaires pour effectuer une électrophorèse
- Chambre d’électrophorèse : c’est une boîte qui permet la génération d’un champ électrique autour d’un gel où sont déposés les échantillons.
- Gel : support, peuvent être en agarose ou polyacrylamide, acrylamide.
- Gels d’agarose : c’est un polysaccharide extrait d’algues marines.
- Gels d’acrylamide : polymère synthétique, thermostable, incolore et chimiquement inerte.
- Tampon de décalage : il fournit le moyen pour la transmission du courant électrique et maintient le pH sans variation pendant le glissement.
- Marqueur de poids moléculaire : Ce sont des molécules d’ADN ou de protéines qui permettent de déterminer par comparaison la taille des fragments d’acides nucléiques ou de protéines contenus dans les échantillons soumis à électrophorèse.
- Tampon de chargement : est un amortisseur qui vise à donner du poids, de la densité et de la couleur à l’échantillon, ce qui facilite son dépôt dans le puits et empêche sa sortie du gel ; permet en outre de surveiller le mouvement de l’échantillon dans le gel.
- Transiluminateur ultraviolet : dispositif qui transmet la lumière du spectre ultraviolet à travers l’échantillon, en excitant la molécule chromogénique qui émet de l’énergie fluorescente qui permet de la visualiser
Étapes dont une électrophorèse typique est constituée
- Préparer un gel d’agarose ou d’acrylamide à la concentration nécessaire.
- Mélanger les échantillons à analyser avec un tampon de charge approprié.
- Charger les échantillons dans le gel.
- Effectuer la course électrophorétique à la tension appropriée.
- Visualiser les acides nucléiques
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