Électrophorèse : quels sont les réactifs nécessaires ?

août 23, 2021by Kalstein
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L’électrophorèse est une technique analytique dans laquelle un courant électrique contrôlé est utilisé afin de séparer les biomolécules selon leur rapport taille/charge électrique, en utilisant une matrice gélatineuse comme base.

Quels rectifs sont utilisés en électrophorèse ?

L’électrophorèse est réalisée avec un équipement composé d’une charge négative à une extrémité et d’une charge positive à l’autre, appelé système d’électrophorèse. Dans cette technique, des réactifs sont utilisés tels que :

  • Tampon de chargement : C’est une solution qui est mélangée à l’échantillon avant de l’appliquer sur le gel. Ses composants ont plusieurs objectifs :

En électrophorèse d’ADN : Glycérol pour donner de la densité à l’échantillon et faciliter son application dans les puits. Le bleu de bromophénol (ou un autre colorant comme le xylène-cyanol) comme marqueur du front avancé de l’électrophorèse. De plus, sa couleur est une aide visuelle lors du chargement de l’échantillon dans les puits. Tampon pour stabiliser le pH et donc la charge des molécules.

En électrophorèse des protéines SDS-PAGE, il est également appelé tampon de rupture (car il provoque une dénaturation) : le glycérol pour ajouter de la densité à l’échantillon et faciliter son application dans les puits. Le bleu de bromophénol comme marqueur du front avançant de l’électrophorèse. De plus, sa couleur est une aide visuelle lors du chargement de l’échantillon dans les puits. SDS pour provoquer la dénaturation des protéines (aidée par un bref chauffage à 90-100 ° C). β-mercaptoéthanol pour rompre les liaisons disulfure (une réaction de réduction, le disulfure est converti en deux thiols). Tampon pour stabiliser le pH et donc la charge des molécules.

  • ADN agarose : C’est un polysaccharide synthétisé par certaines algues, qui fait partie de l’agar-agar (un ingrédient des milieux de culture). Pour son utilisation en électrophorèse, un produit plus purifié est utilisé.
  • Polyacrylamide: Le polyacrylamide est un polymère réticulé qui forme des gels poreux. Une polymérisation chimique d’un mélange d’acrylamide et de bisacrylamide [N,N’-méthylène-bis(acrylamide)] est réalisé
  • Protéines d’ADN de persulfate d’ammonium : bien qu’elles ne fassent pas partie du gel, elles sont utilisées comme réactif dans la formation de polyacrylamide.
  • TEMED : La tétraméthyléthylènediamine (TEMED) accélère la réaction de polymérisation de l’acrylamide, car elle propage la génération de radicaux libres. Facilite la réaction par laquelle le polymère d’acrylamide est formé.
  • Coomassie Blue : Le nom complet est Coomassie R-250 Brilliant Blue. C’est un composé coloré qui se lie à toutes sortes de proté
  • Bleu de bromophénol : C’est un composé coloré et chargé utilisé pour vérifier le déroulement de l’électrophorè En électrophorèse, en raison de sa plus petite taille, il se déplace plus rapidement que les protéines ou la plupart des molécules d’ADN (celles supérieures à 300 pb), c’est-à-dire qu’il marque le « front d’avance ».
  • Xylène cyanol : Ce sont des composés colorés et chargés utilisés pour vérifier le déroulement de l’électrophorè En électrophorèse, le xylène-cyanol se déplace à peu près comme des molécules d’ADN de 3 500 à 5 000 pb.
  • Bromure d’éthidium : C’est un composé intercalant, c’est-à-dire qu’il a une affinité pour se lier à l’ADN, car il est introduit entre ses bases empilé Son utilité découle également de sa fluorescence, renforcée en étant dans un environnement hydrophobe, c’est-à-dire en étant lié à l’ADN. Il est excité avec une lumière ultraviolette à ondes courtes, 254 nm, et émet sa fluorescence sous forme de lumière visible, de couleur rose-orange.

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