Quels sont les principes de l’électrophorèse ?

juin 29, 2022by Kalstein
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Cette technique est très utilisée dans les laboratoires, en particulier dans les laboratoires de biologie moléculaire, car elle est utilisée dans des procédures importantes telles que : séparation, analyse et purification de l’ARN, de l’ADN, ou des protéines, des acides nucléiques, ce processus est effectué parce que la plupart des biomolécules ont une charge électrique où leur ampleur dépend du pH du milieu dans lequel elles se trouvent ; de ce fait, les biomolécules se déplacent lorsqu’elles sont soumises à un champ électrique vers le pôle de charge opposé à celui de la molécule.

Son fonctionnement est un processus simple, sépare les molécules selon leur taille et leur charge électrique, pour cela on utilise un courant électrique qui pousse à déplacer les molécules à travers un gel ou une autre matrice., puis les pores du gel agissent comme un tamis, permettant aux molécules plus petites de se déplacer plus vite que les molécules plus grandes, pour connaître la taille des molécules d’un échantillon, elles se comparent aux standards de tailles établies qui se séparent dans le même gel.

Comme pour la migration des molécules dans l’électrophorèse.

Dans le cas des protéines qui peuvent avoir une charge positive ou négative, elles sont généralement à charge neutre, pour la migration des molécules on effectue un prétraitement avec des détergents, comme le dodécylsulfate de sodium (SDS), qui leur confère une charge négative ; les protéines de l’échantillon sont ainsi homogénéisées et toutes migrent vers le pôle positif ; ne sont séparés que par taille.

Maintenant, du côté des acides nucléiques ont seulement une charge négative, en raison de leur squelette de phosphates, au lieu de l’électrophorèse, fait migrer les acides nucléiques vers le pôle positif, appelé anode. Cette technique de migration est ce que nous appelons le principe de l’électrophorèse, où se produit proportionnellement le déplacement des molécules à travers un gel ou un autre type de matrice poreuse, en utilisant les paramètres de poids moléculaire ou de taille ; mouvement généré par le champ électrique.

Les principes de l’électrophorèse.

Ce principe est basé sur les techniques utilisées pour la migration des molécules, ce processus est réalisé dans une sorte de boîte qui a une charge avec une extrémité positive d’un côté et une charge négative de l’autre côté, quand il est placé à l’intérieur d’une molécule chargée à l’intérieur, elle se déplace selon un modèle spécifique, c’est-à-dire si les molécules ont une charge négative ils vont migrer vers la charge positive, mais au contraire si elle est chargée positivement car elle se déplace vers le côté négatif. 

Lorsque vous analysez les protéines dans un gel, vous prenez toute la protéine pour voir à quel point elle est grande, en respectant le principe suivant que plus elle est courte, plus elle migre dans le gel, de sorte que les petites protéines finiront dans la partie inférieure du gel, parce qu’elles sont allées plus loin, et les plus grandes finiront par rester sur le dessus. Mais dans le cas de l’ADN, nous travaillons avec une très longue molécule, et les scientifiques choisissent donc de couper l’ADN avec des choses comme les enzymes de restriction, ce qui rend l’ADN plus facile à manipuler en plus petits morceaux, puis selon leur taille, ils migrent plus ou moins vers le gel et finissent par monter ou descendre.

Éléments nécessaires pour une électrophorèse

Pour effectuer une électrophorèse, il faut un certain nombre d’éléments, tels que : chambre d’électrophorèse, peignes pour puits, gel, transluminateur, source de puissance, tampon de décalage, marqueur de poids moléculaire, tampon de charge ; il est important de noter que les chambres d’électrophorèse verticale et le pôle positif sont situés dans la partie inférieure de la chambre et dans les horizontales, à l’une des extrémités. Dans les deux types de caméras, le pôle positif est identifié par le rouge et le pôle négatif par le noir.

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