Le microscope, qui est un équipement optique utilisé dans les laboratoires, a la capacité d’observation à des échelles d’approche, en respectant l’analyse des particules et l’image que vous obtenez, c’est vraiment une recherche sur la composition des objets.

En ce qui concerne le microscope à fluorescence, il permet à la lumière d’irradier l’échantillon, puis de dévier la lumière la plus faible émise de l’image. Il s’agit d’un équipement optique conventionnel, avec un adaptateur de fluorescence, qui permet d’effectuer l’observation optique de l’échantillon, à la fois conventionnel et avec contraste avec fluorescence.

L’image captée est le résultat de l’émission électromagnétique exprimée par les molécules qui ont attiré l’excitation primaire, et renvoyé une lumière avec une plus grande longueur d’onde. Pour ne laisser passer que l’émission secondaire souhaitée, des filtres appropriés doivent être placés sous le condensateur et au-dessus de l’objectif.

Principes du microscope de fluorescence

Le microscope à fluorescence fonctionne selon le principe de luminosité de la fluorescence. Cette technique de recherche se distingue par le haut niveau d’amplitude que vous pouvez atteindre avec votre technique d’analyse. Dans la fluorescence, deux éléments chimiques interagissent. Voici :

• Fluorochrome : C’est un noyau qui fonctionne essentiellement comme un colorant, qui crée un certain contraste dans la zone d’intérêt d’étude ou d’observation.
• Fluorophore : est une protéine qui contient des caractéristiques de fluorescence et se comporte comme un type de réflecteur. En effet, elle attire l’énergie avec des ondes à amplitude courte et les répète avec une amplitude d’ondes supérieure à celles reçues.

En ce sens, il possède une méthode d’éclairage fournie par un émetteur de lumière halogène, qui passe par un filtre qui normalise les ondes avec amplitude nécessaires pour stimuler le fluorochrome. Le résultat se reflète dans un dichroïque et a une incidence sur l’échantillon.

La stimulation du fluorochrome répète l’énergie avec une amplitude d’onde supérieure à celle reçue. Cette énergie lumineuse vous transmet par le dichroïque. Il passe enfin par un second filtre qui sélectionne uniquement les ondes avec amplitude émise par le fluorochrome.

Fonctions du microscope à fluorescence

Tout d’abord, le microscope possède un filtre qui permet l’entrée du rayonnement avec une longueur d’onde spécifique, qui est la même que celle du matériau fluorescent. Ensuite, les radiations impactent avec les atomes sur le spécimen, et les électrons sont excités à un niveau d’énergie plus élevé. Lorsqu’ils se détendent à un niveau inférieur, ils émettent de la lumière, qui permettent d’être détectables, et la fluorescence émise à partir de l’échantillon, est séparée de l’excitation la plus brillante avec un second filtre et est remplie, grâce à l’émission de la lumière moindre, avec une longueur d’onde plus grande que celle utilisée pour l’éclairage.

De même, il permet de déterminer la distribution d’une seule espèce de molécule, sa quantité et sa localisation à l’intérieur de la cellule. Des études de localisation et d’interaction peuvent être réalisées, ainsi que l’observation des concentrations d’ions et de processus intra et extracellulaires tels que l’endocytose et l’exocytose.

De même, le microscope par fluorescence, est applicable pour:

• Marquage des molécules dans les cellules et les tissus en vue de leur caractérisation et identification.
• Étude de cellules normales et pathologiques.
• Études immunologiques.
• Minéralogie.

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