Spectrophotomètre : courbes cinétiques

septembre 3, 2021by Kalstein
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Un spectrophotomètre est un équipement utilisé pour mesurer l’absorbance d’un échantillon, en fonction de la longueur d’onde du rayonnement électromagnétique. Il existe plusieurs types de spectrophotomètres. Ceux-ci sont regroupés selon le type d’échantillon analysé; Il existe l’absorption atomique et l’absorption moléculaire (communément appelée spectrophotomètre UV-VIS).

Les spectrophotomètres sont utilisés dans les laboratoires pour déterminer ce qu’est le faisceau de rayonnement électromagnétique ou de lumière et ainsi identifier, qualifier et quantifier son intensité. De la même manière, il permet de déterminer son efficacité, sa sensibilité, sa résolution et sa gamme spectrale. Ce qui dépendra des variabilités de la conception et du choix des composants optiques qu’elle contient.

L’étude au niveau biochimique de toute biomolécule nécessite l’utilisation de techniques analytiques permettant sa détermination qualitative et quantitative, ainsi que sa caractérisation physico-chimique et biologique. L’une des méthodes les plus simples, les plus accessibles, les plus utiles et les plus utilisées est la spectrophotométrie en général et l’ultraviolet-visible en particulier. Les biomolécules peuvent être identifiées et quantifiées en solution et dans des échantillons biologiques, grâce à l’utilisation de réactifs spécifiques qui réagissent avec le composé à analyser et forment un produit coloré qui permet de le détecter dans des échantillons complexes.

Quelle est la base d’un spectrophotomètre ?

Le fondement de la spectrophotométrie est dû à la capacité des molécules à absorber le rayonnement, y compris le rayonnement dans le spectre UV-visible. Les longueurs d’onde de rayonnement qu’une molécule peut absorber et l’efficacité avec laquelle elles sont absorbées dépendent de la structure atomique et des conditions de l’environnement (pH, température, force ionique, constante diélectrique), cette technique constitue donc un outil précieux pour la détermination et la caractérisation des biomolécules.

Qu’est-ce qu’une courbe cinétique ?

La cinétique enzymatique étudie la vitesse des réactions chimiques catalysées par les enzymes. L’étude de la cinétique et de la dynamique chimique d’une enzyme permet d’expliquer les détails de son mécanisme catalytique, son rôle dans le métabolisme, comment son activité est contrôlée dans la cellule et comment son activité peut être inhibée par des médicaments ou des poisons ou renforcée par d’autres types de molécules.

Un dosage enzymatique est une procédure, effectuée dans un laboratoire, par laquelle la vitesse d’une réaction enzymatique peut être mesurée. Comme les enzymes ne sont pas consommées dans la réaction qu’elles catalysent, les dosages enzymatiques mesurent généralement les changements subis soit dans la concentration du substrat (qui diminue), soit dans la concentration du produit (qui augmente). Il existe différentes méthodes pour effectuer ces mesures. La spectrophotométrie permet de détecter les changements d’absorbance de la lumière par le substrat ou le produit (selon leur concentration) et la radiométrie implique l’incorporation ou la libération de radioactivité pour mesurer la quantité de produit obtenue par temps. Les tests spectrophotométriques sont les plus utilisés, car ils permettent de mesurer la vitesse de réaction en continu.

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